淋巴肿瘤免疫组化
“免疫组化”是“免疫组织化学”的简称，是一种利用抗原、抗体的特异性结合反应来检测组织中有无相应抗原物质存在的一种组织化学染色方法。淋巴瘤的病理诊断，免疫组化检查是一项不可或缺的重要辅助手段。免疫组化在淋巴瘤诊断和治疗中的意义主要体现在以下几个方面：
（1）帮助区分肿瘤起源细胞系（例如，所患非霍奇金淋巴瘤是B细胞肿瘤还是T细胞肿瘤）。
（2）通过肿瘤免疫表型分析来帮助判断肿瘤具体类型（例如，滤泡性淋巴瘤CD5-、CD10+、CD23-、BCL6+，小淋巴细胞淋巴瘤CD5+、CD10-、CD23+、BCL6-）。
（3）检测某些肿瘤特有的遗传学改变以助确诊（例如，套细胞淋巴瘤多有11号和14号染色体易位而导致cyclin D1基因转位和cyclin D1蛋白异常高表达，所以免疫组化染色cyclin D1阳性则提示为套细胞淋巴瘤）。
（4）帮助指导治疗和判断疾病预后（例如，CD20阳性B细胞淋巴瘤患者可选择使用“美罗华”治疗，又如，通过对弥漫性大B细胞淋巴瘤病例进行CD10、BCL6、MUM1等抗原检测可大致区分是预后相对较好的“生发中心B细胞型”还是预后相对差一些的“非生发中心B细胞型”）。
（5）对于区分某些良、恶性淋巴组织增生性病变也有一定帮助。
免疫组化westernblot
1、原理不同：
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
2、组织定位不同：
免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。westernblot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确，但是在组织定位上不如免疫组化。
扩展资料：
一、免疫组化（SP法）操作步骤：
1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行。
3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10－15分钟。
4、缓冲液洗5min／2次。
5、滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。
6、缓冲液洗5min／2次。
7、滴加一抗工作液37℃孵育 1－2小时。
8、缓冲液洗5min／2次。
9、滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。
10、缓冲液洗5min／2次。
11、滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。
12、缓冲液洗5min／2次。
13、向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate）中滴加1－2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。
14、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
二、westernblot操作步骤：
1、SDS－PAGE试剂：见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1．0MTris－HCl（pH6．8）1．0ml；10％SDS6．0ml；β－巯基乙醇0．2ml；ddH2O2．8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸2．9g；Tris5．8g；SDS0．37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0．01MPBS（pH7．4）：NaCl8．0g；KCl0．2g；Na2HPO41．44g；KH2PO40．24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰0．2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118ml。包被液（5％脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1．0g溶于20ml的0．01MPBS中。
6、显色液：DAB6．0mg；0．01MPBS10．0ml；硫酸镍胺0．1ml；H202 1．0μl。
