免疫组化是什么检查项目
免疫组化是什么?
是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂
(荧光素、酶、金属离子、同位素)
显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组化和基因检测哪个准
1、原理不同:
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
2、组织定位不同:
免疫组化在组织定位和定性上比较准确,但是在定量上不够准确。western blot因为有内参标定,所以在定量上要更加准确,但是在组织定位上不如免疫组化。
一、 免疫组化(SP法)操作步骤:
1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行。
2、缓冲液洗 3min/2 次。
3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
4、缓冲液洗 5min/2 次。
5、滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
6、缓冲液洗 5min/2 次。
7、滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。
8、缓冲液洗 5min/2 次。
9、 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子),在室温下孵育 20 分钟。
10、缓冲液洗 5min/2 次。
11、滴加 HRP Polymer(酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。
12、缓冲液洗 5min/2 次。
13、向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。
14、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。
二、 western blot操作步骤:
1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。
2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。
3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000ml。
4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g;加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液:考马斯亮兰 0.2g;甲醇80ml;乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。
6、显色液:DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml;硫酸镍胺 0.1ml;H202 1.0μl。
免疫组化和fish的区别
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确,但是在定量上不够准确。